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pcr引物长为什么延伸温度会升高?
如题所述
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相似回答
pcr引物
长度
答:
1、
引物
的长度一般为15-30 bp,常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过
长会
导致其
延伸温度
大于74℃,不适于Taq DNA聚合酶进行反应。2、 引物序列在模板内应当没有相似性较高,尤其是3’...
PCR
技术
引物
原则
答:
引物
长度与
延伸温度
基本呈正比,还影响
pcr的
特异性。延伸温度一般在酶活性温度附近,从而去调整引物长度。引物长度的上限并不很重要,主要与反应效率有关。由于熵的原因,引物越短,它退火结合到靶dna上形成供dna聚合酶结合的...
为什么
在
PCR反应
过程中,使用三个不同的
温度
变化
答:
第二个
温度
点叫做退火,根据
引物
的TM算出,一般比TM低5度,有利于引物的结合。第三个温度叫做
延伸
,一般采用72度。是引物结合后DNA聚合酶按照模板合成新的链。一分钟一千个碱基对。如此循环。现在很多
PCR
都采用2部法,由于...
pcr
技术的三个阶段
答:
PCR
技术的三个阶段分别是变性、退火和
延伸
。变性阶段:这个阶段主要是将DNA双链分离成两条单链,使其变性成为单链模板。需要将反应体系加热至94-96℃,使DNA双链断裂。退火阶段:在一定的
温度
下,引入一组特异性的
引物
,使...
pcr反应延伸
的
温度
答:
75℃之间,常用温度为72℃,过高的
延伸温度
不利于
引物
和模板的结合,聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,
PCR的
最大特点是能将微量的DNA大幅增加。
pcr引物
设计的基本原则有哪些
答:
2.
引物
长度一般在15~30碱基之间。 引物长度(primerlength)常用的是18-27bp,但不应大于38,因为过
长会
导致其
延伸温度
大于74℃,不适于TaqDNA聚合酶进行反应。3.引物GC含量在40%~60%之间,Tm值最好接近72℃。 GC含量...
PCR的
变性、退火、
延伸
分别指?
答:
变性:加热使模板DNA在高温下(94℃左右)双链间的氢键断裂而形成两条单链。退火;使溶液
温度
降至50~60℃,模板DNA与
引物
按碱基配对原则互补结合。
延伸
:溶液反应温度升至72℃,耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板,在引物的...
pcr中温度
周期性变化的目的
答:
三个目的。
pcr
技术有三次
温度
变化处理,其作用分别是94至98摄氏度处理,促进模板DNA变性,由双链DNA变成单链DNA,52至65摄氏度处理,降温退火处理,促进变性的DNA与
引物
通过碱基互补配对,形成引物与模板结合的复合物,为聚合...
PCR
技术反应过程中控制不同
温度
的意义?
答:
对
温度
的控制是为了实现体内DNA增值的过程。变性是为了让模板在高温(94°C)下解链为单链模板,退火(30-60)是为了让
引物
在低温下分别与变性的模板相结合,
延伸
(65-75)是由耐热DNA聚合酶的最适温度决定的,以引物为...
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