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Western blot实验电泳时 Marker条带不清晰,很弥散,无法辨别有几条带,请问什么原因可以导致啊?
如题所述
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第1个回答 2010-11-22
如果只是marker不清晰,就是markr没煮好,或者降解了。重新换一个新marker,严格按配方煮。
如果所有条带都这样那就是胶的问题。
胶的前沿跑的齐吗?速度如何?如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
第2个回答 2010-11-22
Marker上样量太少
国产marker得上到5ul以上
进口的3ul以上
第3个回答 2010-11-22
我觉得主要是胶和电泳缓冲液的问题,
Tris 8.8 6.8 浓度,pH是否正确。SDS的纯度可能也有关系。
丙烯酰胺
的浓度,交联度合适不合适。
做胶的时候各种溶液是否加的正确,胶的浓度是否合适,
电泳缓冲液的浓度,pH有无问题。
marker是不是时间太长了。本回答被提问者采纳
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Western
Blot
结果
条带
全面分析,总有一款适合你
答:
高背景</: 可能是封闭步骤、一抗浓度或洗膜不够彻底
,解决建议</: 调整一抗浓度,延长洗膜时间以确保清晰。非特异性条带</: 一抗可能未针对性强,对策</: 寻找更特异的一抗替换现有。气泡困扰</: 电转时膜上的气泡可能导致条带瑕疵,解决</: 在电转过程中确保膜表面无气泡。条带中心空白</...
蛋白
Marker
为
什么
跑的
条带不清楚
?
答:
原因很多哦,
首先确认胶的浓度、PH值,离子强度是不是正常,这些都会影响条带的质量
。其次确定电泳液的PH、离子强度是否正确,如甘氨酸浓度太低时,蛋白会浓缩不好;电泳液最好新鲜配制。蛋白Marker的质量也会有所影响的,可以用下absin的,他家我们用过还可以。
...的
条带
是
弥散
的
,marker
跑的也
不清楚,
向高手们请教一下
原因
答:
buffer)。如果你的目标片段较小(小于100bp),请适当提高凝胶浓度(1.2%-1.5%)。其次,如果你的
marker
也有问题,极大可能是你制作凝胶或电泳的缓冲液有问题。请仔细检查是否为1X TE buffer。再次,请使用新鲜的agarose gel进行
电泳,
如果保存时间过长(即使是在4摄氏度下),胶体也会出现问题。
...糖
电泳中,
跑完后
条带不清晰,
不知道是
什么原因,
谁能帮我分析一下呢...
答:
如果你的
Marker
跑出来没有问题,从上图看应该是你的质粒DNA浓度太高,最好质粒上样总量在500ng左右,不要超过1000ng。目标条带浓度过高容易造成拖带。最后,质粒由于是环状,超螺旋DNA和线性DNA的电泳速度不一样,所以电泳前一定要做酶切,把环状质粒切成线状;最好在质粒上有两个酶切位点,这样酶切...
跑
westernblot时电泳时
的
条带
呈斜行是咋回事
答:
跑
westernblot时电泳时
的条带呈斜行可能有以下几种原因:1. 电泳凝胶配制时未搅拌均匀,这可能导致条带未能直线跑完。2. 电泳凝胶中混入气泡,这可能使条带被挤压倾斜。3. 样品缓冲液存在干扰,这可能导致条带迁移率不统一。4. 上样量过大,被其他泳道挤压,这也可能使条带呈斜行。请注意,以上...
...连点样口都没有任何东西
Marker
出来了 但颜色很淡
有什么原因
...
答:
跑
电泳时
看不到结果可能有以下原因:1. 样品问题:样品可能没有充分提取或者制备过程中出现了问题,导致无法在
电泳中
显示出条带。同时,如果样品中没有任何DNA或RNA,或者样品中含有的DNA或RNA数量较少,也可能导致无法看到结果。2. 电泳操作问题:如果在操作过程中出现错误,如加样时漏掉、点样量过少...
跑琼脂糖凝胶
,条带
特别宽,连
marker
得条带都很宽,以至于分不清条带...
答:
检查你的梳子,很可能是没有洗干净导致点样孔内有杂质造成
条带弥散
。还有是你的胶融化的不充分,或者凝结不充分。请保证煮沸两次以上。凝固时凝固半小时以上。
...5回了
,条带
颜色总是特别浅看
不清楚,
连
MARKER
都看不清楚,是怎么回事...
答:
1 上样量太少,或者
电泳时候
loading buffer不行,导致蛋白跑了 2 脱色时间不够,建议K-G染色后,脱色液在30min内换两次 3 重新按标准配置电泳缓冲液。
做
Western
Blot
跑
电泳
之后的胶上
Marker
的
条带,
比较
清晰,
但与模板Marke...
答:
得看你少的哪
条带,
一般来说最后一条带比较容易看不到,可能是由于你配胶的溶液放置时间长了浓度不够了,比如30%的丙烯酰胺。也可能是跑出去了或没跑完你就停了。
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